Ultraestructura de Acanthamoeba sp. (Amebozoa, Acanthamoebidae)

Abstract

Acanthamoeba sp., protozoo de amplia distribución ambiental, aislado de aguas dulces, salobres, aire y polvo atmosférico, alterna entre estadios de trofozoíto, pre-quiste y quiste. En el hombre causa queratitis, encefalitis granulomatosa amebiana y acanthamoebosis cutánea. El objetivo del presente estudio fue documentar la ultraestructura de Acanthamoeba sp., mediante Microscopía Electrónica de Transmisión. Para ello 50 ml de un aislamiento en medio MYAS de Acanthamoeba sp., aislada de un paciente con queratitis de la ciudad de Bahía Blanca (Argentina), se centrifugaron a 2000 RPM, 15 minutos y se fijaron en glutaraldehído 4%, post-fijaron con OsO4, deshidrataron con etanol e incluiyeron en resina Spurr. Los cortes ultrafinos fueron contrastados con acetato de uranilo y citrato de plomo. Las observaciones fueron realizadas utilizando un microscopio electrónico de transmisión marca JEOL modelo 100 CXII a 80 KV. Los resultados mostraron trofozoítos con diámetros de 5,1 a 11,1 μm, rodeados por membrana plasmática y forma irregular. Para la incorporación de partículas sólidas, se documentó el proceso fagocítico. No se evidenció endocitosis mediada por receptores. En el citoplasma se visualizaron ectoplasma y endoplasma, abundantes mitocondrias, aparato de Golgi, retículo endoplásmico rugoso y vacuolas digestivas. Las vacuolas de exclusión de agua presentaron contenidos límpidos, y aparecen rodeadas por un sistema de túbulos y vesículas. El núcleo se observó con un nucléolo central esférico. El pre-quiste, con diámetro de 5,8 a 8,8 μm se observó redondeado, sin proyecciones citoplasmáticas y rodeado de una sustancia amorfa. El quiste, de 4,1 a 8,9 μm de diámetro, con doble pared, compuesta por un exoquiste ondulado y un endoquiste poliédrico o estrellado, separados por un espacio. Este estadio conservó las organelas de los trofozoítos, en un citoplasma más denso y algunos autofagosomas. El estudio de la estructura fina de Acanthamoeba sp., como la disposición de las mitocondrias y la organización de la pared quística ayudarían a comprender mejor su biología.

Acanthamoeba sp. is a protozoan that is widely distributed in different compartments of the environment such as bodies of freshwater and brackish water, air and atmospheric particles. In humans cause keratitis, granulomatous amoebic encephalitis and cutaneous acanthamoebosis. The parasite is found as a trophozoite or a cystic, with a pre-cystic, transitional form between the two. The objective of the present work is to describe the ultrastructure of Acanthamoeba sp. isolated from a patient with keratitis, in the city of Bahía Blanca, Argentina. Fifty ml of an isolate of Acanthamoeba sp. were separated and placed in MYAS medium, centrifuged at 2,000 rpm for 15 min, fixed in 4% glutaraldehyde, additionally fixed with OsO4, dehydrated with ethanol and embedded in Spurr resin. Ultrafine slices were contrasted using uranyl acetate and lead citrate. Preparations were observed using a transmission electron microscope (JEOL, 100 CXII a 80 KV). Result showed the presence of trophozoites that were irregularly shapped, measured 5.1-11.1 μm in diameter, and were surrounded by a plasmatic membrane. We observed phagocytosis in association with engulfment of solid particles, but no receptor mediated endocytosis was evident. Ectoplasm, endoplasm, abundant mitochondria, Golgi apparatus, rough endoplasmic reticulum, and digestive vacuoles were observed in the cytoplasm. Water exporting vacuoles presented clear contents and were surrounded by tubules and vesicles. The nucleus had a central and spherical nucleolus. The pre-cyst was spherical, with a diameter of 5.5-8.8 μm, it was surrounded by amorphous substance and lacked cytoplasmic projections. The cyst was 4.1-8.9 μm in diameter, with a double wall composed of an undulated exocyst and a polyhedric or star-shaped endocyst, both separated by a space. In this stage, Acanthamoeba sp., preserved the trophozoite organelles and some pre-cyst autophagosomas inside a denser cytoplasm. The ultrastructural study of Acanthamoeba sp., the position of mitochondria and the arrangement of cystic wall are important to better understand the biology of this parasite.